La eficiencia de amplificación indica con qué fidelidad tu ensayo de qPCR duplica el ADN plantilla en cada ciclo — y es la verificación de calidad más importante antes de confiar en cualquier resultado de cuantificación de ese ensayo. Esta calculadora convierte la pendiente de una curva estándar en un porcentaje de eficiencia, un multiplicador de veces por ciclo y un veredicto de calidad de aprobado/rechazado.
Cómo funciona la Calculadora de Eficiencia de qPCR
La calculadora implementa la relación estándar entre la pendiente de una curva estándar de qPCR y la eficiencia de amplificación: E = 10^(−1/pendiente) − 1. Esta fórmula surge directamente del modelo de amplificación exponencial — después de n ciclos, la cantidad de plantilla crece por un factor de (1 + E)^n, y Ct es proporcional a −log₁₀ de la cantidad inicial dividida entre log₁₀(1 + E). Reordenando para un ajuste lineal de Ct contra log(dilución) se obtiene la conversión de pendiente a eficiencia usada aquí. Una pendiente de exactamente −3.32 (que es −1/log₁₀(2)) corresponde a E = 1, es decir, duplicación exacta — 100% de eficiencia.
Entradas y qué significan
La única entrada es la pendiente de la regresión lineal de tu curva estándar (Ct en el eje y, log₁₀ del factor de dilución en el eje x). La mayoría de los programas de instrumentos de PCR en tiempo real calculan esta pendiente automáticamente una vez que ingresas una serie de diluciones y sus valores de Ct — no necesitas ajustar la regresión a mano. La pendiente siempre es negativa porque Ct disminuye al aumentar la concentración de plantilla. Las pendientes típicas del mundo real para un ensayo funcional caen entre aproximadamente −3.1 y −3.6, correspondiendo a una eficiencia de aproximadamente 90–110%.
Límites y casos extremos
La eficiencia calculada de esta forma asume que tu serie de diluciones abarca un rango donde la cinética de la PCR se mantiene lineal — reacciones muy sobre o subdiluidas, que saturan la reacción de detección o que incluyen errores de pipeteo pueden distorsionar la pendiente independientemente de la eficiencia real del ensayo. Una eficiencia superior al 110% suele indicar una imprecisión de pipeteo en la serie de diluciones o una coamplificación de productos inespecíficos, más que una reacción genuinamente "superficiente". Una pendiente de exactamente cero no está definida para esta fórmula (división entre cero) y señala una curva estándar fallida o plana — vuelve a correr la serie de diluciones en lugar de confiar en cualquier valor de eficiencia derivado de ella.