Calculadora de Concentración de ADN

calcular Concentración de ADN o ARN de una lectura del espectrofotómetro A260, con el factor de dilución y el Relación de pureza 260/280.

Convierta la lectura de absorbancia A260 de un espectrofotómetro en una concentración de ácido nucleico: C = A260 × factor × dilution. El factor depende del tipo de ácido nucleico.

UN260 reading

Absorbancia a 260 nm (sin unidades, por ejemplo, de un NanoDrop).

Nucleic-acid tipo

Factor de dilución

1 si se lee la muestra sin diluir.

UN280 reading — opcional

Agregue esto para ver también la relación de pureza 260/280.

Resultado

—

Introduzca valores para calcular.

Concentración—

Pureza 260/280—

Como-read (no scaling)—

5 min de lectura 3 pasos 7 términos 3 ejemplos 6 preguntas frecuentes C = A260 × factor × dilution

Estimar cuánto ADN o ARN hay en una muestra es una de las primeras verificaciones en casi todo flujo de trabajo de biología molecular — antes de clonar, secuenciar, hacer PCR o transfectar.

📋

Paso a paso

Cómo usar esta calculadora

3 pasos

Ingresa tu lectura de A260 y el tipo de ácido nucleico

En la pestaña Concentración, ingresa la absorbancia a 260 nm (A260) de tu lectura de espectrofotómetro o NanoDrop, y selecciona el tipo de ácido nucleico — ADNbc, ADNmc o ARN — ya que cada uno tiene un factor de conversión distinto. Si leíste una muestra diluida, ingresa también el factor de dilución (déjalo en 1 para una lectura sin diluir).

Lee la concentración y la pureza

La tarjeta de resultado muestra la concentración en ng/µL (equivalente a µg/mL) junto con una interpretación en lenguaje sencillo. Agrega una lectura de A280 en el campo opcional para ver también la relación de pureza 260/280 y si se acerca al valor ideal para tu tipo de muestra.

Usa las pestañas Pureza o Dilución para otros ángulos

Cambia a la pestaña Pureza (260/280) para revisar la pureza de la muestra por sí sola a partir de A260 y A280 sin necesidad de un factor de dilución, o usa la pestaña Dilución para escalar una lectura de muestra diluida hasta la concentración de la solución madre original. Todo se actualiza al instante — no hay botón de calcular.

⚡

Referencia

Fórmula y metodología

3 fórmulas

Concentración a partir de A260

C = A260 × factor × dilution

La concentración de ácido nucleico es proporcional a su absorbancia a 260 nm (la ley de Beer-Lambert). El factor convierte una unidad de absorbancia (1.0 DO260, usando una longitud de trayecto óptico estándar de 1 cm) en una concentración de masa: 50 µg/mL para ADN de doble cadena (ADNbc), 33 µg/mL para ADN de cadena sencilla (ADNmc), y 40 µg/mL para ARN. Multiplica por el factor de dilución si la muestra se diluyó antes de leerla. El resultado en µg/mL es numéricamente idéntico a ng/µL.

Relación de pureza 260/280

Purity = A260 / A280

Las proteínas absorben con mayor intensidad cerca de 280 nm, mientras que los ácidos nucleicos absorben con mayor intensidad cerca de 260 nm, así que la relación entre ambas lecturas indica cuánta proteína u otro contaminante está mezclado con el ácido nucleico. El ADN de doble cadena puro tiene una lectura cercana a 1.8; el ARN puro tiene una lectura cercana a 2.0 porque la composición de bases distinta del ARN y su estructura de cadena sencilla desplazan ligeramente hacia arriba su absorbancia.

Escalar una lectura diluida

C_undiluted = A260 × factor × dilution

Cuando una muestra está demasiado concentrada para leerse con precisión (un A260 por encima de aproximadamente 1.0–2.0 pierde linealidad en la mayoría de los instrumentos), se diluye antes de leerla. Multiplicar el A260 diluido por el factor de dilución recupera la concentración de la solución madre original, sin diluir.

📖

Glosario

Términos clave explicados

7 términos

A260 La absorbancia de una muestra a una longitud de onda de 260 nanómetros, el punto donde los ácidos nucleicos (ADN y ARN) absorben luz UV con mayor intensidad. Es la medición principal que toma un espectrofotómetro o NanoDrop para estimar la concentración de ácido nucleico.

Espectrofotometría Una técnica que mide cuánta luz de una longitud de onda específica absorbe una muestra, usada aquí para estimar la concentración y pureza de ácido nucleico a partir de la absorbancia UV a 260 nm y 280 nm.

Factor de ADNbc La constante de conversión de 50 µg/mL por unidad de A260, usada para ADN de doble cadena. Refleja qué tan intensamente absorbe una muestra estándar de doble hélice de ADN la luz de 260 nm por unidad de concentración.

Relación de pureza La relación de absorbancia entre dos longitudes de onda (más comúnmente A260/A280) usada para estimar qué tan contaminada está una muestra de ácido nucleico con proteína u otro material que absorbe UV. Más cerca del valor ideal significa una muestra más pura.

260/280 Abreviatura de la relación de absorbancia A260/A280, la verificación de pureza estándar para ADN o ARN extraído. Una relación baja (bien por debajo de 1.8) suele indicar contaminación con proteína o fenol arrastrada de la extracción.

Factor de dilución Cuántas veces se diluyó una muestra antes de leerla en el espectrofotómetro — un factor de dilución de 10 significa que 1 parte de muestra se mezcló con 9 partes de amortiguador. Multiplicar el resultado de la lectura diluida por este factor recupera la concentración de la muestra original.

NanoDrop Una marca común de espectrofotómetro de microvolumen usado en laboratorios de biología molecular para medir A260, A280 y la concentración y pureza de ácido nucleico derivadas, a partir de tan solo 1–2 µL de muestra sin necesidad de una cubeta.

👥

Escenarios

Ejemplos del mundo real

3 ejemplos

🧬

Revisando una miniprep de plásmido

Concentración básica de ADNbc

Lectura de A260 0.5 Tipo de ácido nucleico ADNbc Factor de dilución 1

C = 0.5 × 50 × 1 = 25 ng/µL. Un A260 de 0.5 para una muestra de ADNbc sin diluir da una concentración de 25 ng/µL — un rendimiento típico para una miniprep de plásmido.

🔬

Leyendo una preparación concentrada de ADN genómico tras dilución

Escalando una lectura diluida

Lectura de A260 (diluida) 0.6 Tipo de ácido nucleico ADNbc Factor de dilución 10

C = 0.6 × 50 × 10 = 300 ng/µL. Se leyó una dilución 1:10 para mantenerse dentro del rango lineal del instrumento; escalar por el factor de dilución muestra que la solución madre sin diluir es de 300 ng/µL.

🥼

Revisando la pureza antes de secuenciar

Relación de pureza 260/280

Lectura de A260 0.5 Lectura de A280 0.28 Tipo de ácido nucleico ADNbc

Purity = 0.5 / 0.28 = 1.79 — justo en el ideal de ~1.8 para ADNbc, indicando una preparación limpia con mínima contaminación proteica, adecuada para secuenciación o clonación posterior.

🔗

Referencia

Citar esta calculadora

APA y MLA

Usa cualquiera de estos formatos para citar esta calculadora en un trabajo o informe.

APA

MLA

📄

Análisis a fondo

Cómo Calcular la Concentración de ADN a partir de una Lectura de A260

5 capítulos · 5 min de lectura

Estimar cuánto ADN o ARN hay en una muestra es una de las primeras verificaciones en casi todo flujo de trabajo de biología molecular — antes de clonar, secuenciar, hacer PCR o transfectar. Los espectrofotómetros modernos y los instrumentos NanoDrop hacen esto rápido, pero interpretar los números correctamente sigue dependiendo de entender qué significan realmente el A260, el factor de conversión y la relación de pureza 260/280.

Por qué el A260 mide la concentración de ácido nucleico

El ADN y el ARN absorben luz ultravioleta con mayor intensidad alrededor de 260 nanómetros, en gran parte debido a los anillos aromáticos de sus bases nucleotídicas. Según la ley de Beer-Lambert, la absorbancia es directamente proporcional a la concentración para una longitud de trayecto fija, así que una lectura de espectrofotómetro a 260 nm (A260) puede convertirse en una concentración una vez que conoces la constante de proporcionalidad correcta para el tipo de ácido nucleico que estás midiendo.

Por qué el factor difiere según el tipo de ácido nucleico

El factor de conversión — 50 µg/mL por unidad de A260 para ADN de doble cadena, 33 µg/mL para ADN de cadena sencilla, y 40 µg/mL para ARN — difiere porque estas moléculas absorben la luz de 260 nm de manera ligeramente distinta por unidad de masa. El apilamiento de bases de la doble hélice en el ADNbc reduce algo su absorbancia comparada con hebras sencillas no estructuradas, razón por la cual el ADNmc y el ARN (ambos típicamente menos apareados en solución) tienen factores por masa más bajos. Usar el factor incorrecto para tu tipo de muestra es una de las fuentes más comunes de una estimación de concentración inexacta.

Leyendo la relación de pureza 260/280

Las proteínas absorben luz UV con mayor intensidad alrededor de 280 nm debido a aminoácidos aromáticos como el triptófano y la tirosina, mientras que los ácidos nucleicos absorben con mayor intensidad a 260 nm. Comparar ambas absorbancias (A260/A280) da entonces una estimación rápida de cuánta contaminación proteica queda en una muestra extraída. Una relación cercana a 1.8 se considera ADN de doble cadena puro; una relación cercana a 2.0 se considera ARN puro. Relaciones notablemente por debajo de estos valores suelen apuntar a proteína o fenol residual del proceso de extracción, mientras que relaciones notablemente por encima pueden indicar contaminación de ARN en una preparación de ADN o una muestra degradada.

Por qué la dilución importa para lecturas precisas

Las lecturas de absorbancia del espectrofotómetro solo son confiablemente lineales con la concentración hasta aproximadamente un A260 de 1.0–2.0, dependiendo del instrumento. Las muestras más concentradas que eso deben diluirse antes de leerse, y luego la concentración calculada de la lectura diluida se multiplica por el factor de dilución para recuperar la concentración de la solución madre original — que es exactamente lo que automatiza la pestaña Dilución de esta calculadora.

Limitaciones de las estimaciones basadas en A260

Las estimaciones basadas en A260/A280 son rápidas y convenientes, pero son menos precisas que los métodos de cuantificación basados en fluorescencia (como los ensayos PicoGreen o Qubit), que se unen específicamente al ADN de doble cadena y son mucho menos sensibles a ARN contaminante, nucleótidos libres o proteína. Para aplicaciones con requisitos de cuantificación estrictos — como la preparación de bibliotecas para secuenciación de nueva generación — los laboratorios a menudo confirman una estimación basada en NanoDrop con un ensayo basado en fluorescencia antes de continuar.

❓

Preguntas

Preguntas frecuentes

6 preguntas

¿Cuál es la fórmula de concentración de ADN a partir de una lectura de A260?+

La concentración (en µg/mL, equivalente a ng/µL) es igual a la lectura de absorbancia A260 multiplicada por un factor de conversión según el tipo de ácido nucleico, multiplicada por el factor de dilución: C = A260 × factor × dilution. El factor es 50 para ADN de doble cadena, 33 para ADN de cadena sencilla, y 40 para ARN.

¿Cuál es el factor de conversión de ADNbc y por qué es 50?+

El factor de ADNbc es 50 µg/mL por unidad de A260 — una constante determinada empíricamente que refleja qué tan intensamente absorbe luz a 260 nm el ADN de doble cadena por unidad de concentración de masa, asumiendo una longitud de trayecto óptico estándar de 1 cm en el espectrofotómetro.

¿Cómo se ve la relación 260/280 de una muestra de ADN pura?+

Una relación 260/280 alrededor de 1.8 generalmente se considera pura para ADN de doble cadena. Relaciones muy por debajo de 1.8 sugieren contaminación con proteína o fenol; relaciones por encima de aproximadamente 1.9–2.0 pueden sugerir contaminación de ARN en una preparación de ADN.

¿Por qué el objetivo de pureza del ARN es distinto, en ~2.0?+

El ARN es predominantemente de cadena sencilla y tiene una composición de bases distinta a la del ADN de doble cadena, ambos factores que desplazan su absorbancia por masa a 260 nm en relación con 280 nm ligeramente más arriba que la del ADNbc — así que una muestra de ARN puro típicamente da una lectura cercana a una relación 260/280 de 2.0.

¿Qué unidades usa esta calculadora?+

A260 y A280 son valores de absorbancia sin unidades. La concentración de salida se da en ng/µL, que es numéricamente idéntica a µg/mL. La relación de pureza 260/280 tampoco tiene unidades — es simplemente el cociente de las dos lecturas de absorbancia.

¿Por qué mi muestra podría mostrar contaminación incluso después de una extracción limpia?+

Una relación 260/280 baja apunta con mayor frecuencia a proteína o fenol residual de los reactivos de extracción en lugar de una preparación fallida — reprecipitar o repurificar la muestra (p. ej. con un lavado adicional de etanol o una limpieza en columna) a menudo lo resuelve. Lecturas de absorbancia generalmente muy bajas también pueden hacer que la relación sea ruidosa, ya que tanto A260 como A280 son números pequeños cercanos al piso de medición del instrumento.

Descarga al instante un PDF de una página con tus números. Añade tu correo para recibir además nuestros consejos ocasionales sobre calculadoras — sin spam, puedes darte de baja cuando quieras. Privacidad.