Uma diluição em série é a maneira padrão pela qual os laboratórios preparam uma gama de concentrações conhecidas a partir de uma única solução estoque — usada em plaqueamento microbiológico, titulação de anticorpos/ELISA, curvas padrão para qPCR e outros ensaios, e qualquer protocolo que precise de várias concentrações espaçadas por um fator constante. Esta calculadora executa a matemática da série passo a passo, a transferência por tubo e os volumes de diluente, e a diluição geral de um conjunto de entradas.
Como funciona a calculadora de diluição serial
Em uma diluição em série, cada tubo é feito a partir do tubo anterior, e não diretamente do caldo — exceto o primeiro tubo, que vem do caldo. Como a redução ocorre passo a passo, a concentração na etapa n é igual à concentração do estoque dividida pelo fator de diluição elevado à n-ésima potência (DFⁿ). Esta combinação é a razão pela qual um factor modesto por passo, como uma diluição de 10 vezes, produz uma enorme redução global após apenas um punhado de passos – cinco passos de 10 vezes já dão uma diluição global de 100.000 vezes. É também por isso que o gráfico de concentração usa um eixo y logarítmico: em uma escala linear, as etapas posteriores pareceriam indistinguíveis de zero, embora não o sejam.
Entradas e o que elas significam
A concentração de estoque é o valor inicial da sua solução não diluída, em qualquer unidade que você esteja rastreando — ng/mL, UFC/mL, molaridade ou qualquer outra unidade de concentração consistente. O fator de diluição por etapa deve ser superior a 1; as escolhas comuns são 2 para diluições duplicadas (por exemplo, titulação de anticorpos) e 10 para diluições logarítmicas (por exemplo, plaqueamento microbiológico). O número de etapas é quantos tubos vêm depois do estoque. O volume por tubo é o volume final, em mililitros, que cada tubo deve conter depois que a alíquota transferida e o diluente forem combinados — ele determina os volumes de transferência e diluente na guia Volumes, mas não afeta a série de concentrações, pois a concentração depende apenas do estoque e do fator de diluição.
Limites e casos extremos
O fator de diluição deve ser maior que 1 — um fator de exatamente 1 significa que nenhuma diluição ocorre, e um fator abaixo de 1 exigiria um volume de diluente negativo, o que não é fisicamente significativo. Contagens de passos muito grandes combinadas com grandes fatores podem produzir concentrações extremamente pequenas que são fáceis de interpretar mal em uma escala linear, e é por isso que esta calculadora sempre traça a série em um eixo logarítmico. A calculadora pressupõe mistura e pipetagem perfeitas em cada etapa; na prática, pequenos erros de pipetagem se acumulam em uma série da mesma forma que a concentração, portanto, uma série mais longa carrega mais incerteza cumulativa do que uma curta.