Kepadatan sel — jumlah sel per mililiter suspensi — adalah salah satu pengukuran paling umum dalam kultur sel, baik Anda merencanakan transfeksi, menyemai cawan, atau menyiapkan rangkaian pengenceran. Kalkulator ini mengubah jumlah hemositometer mentah menjadi konsentrasi, kemudian rantai konsentrasi tersebut menjadi hasil sel total dan pengenceran yang diperlukan untuk mencapai kepadatan penyemaian tertentu.

Dari mana faktor konversi 10⁴ berasal

Hemocytometer Neubauer standar digores sehingga setiap kotak penghitungannya yang besar mencakup area yang diketahui, dan ruangan tersebut memiliki kedalaman tetap sebesar 0,1 mm ketika kaca penutup dipasang dengan benar. Artinya, setiap persegi memiliki volume tepat 0,1 mm³, yang setara dengan 0,1 mikroliter (0,0001 mL). Untuk mengubah jumlah per persegi menjadi sel per mililiter, Anda membaginya dengan 0,0001 mL volume tersebut — sama dengan mengalikannya dengan 10.000 (10⁴). Itulah sebabnya rumus ini mengalikan jumlah rata-rata per persegi dengan 10⁴: rumus ini hanya mengubah volume kecil yang dihitung menjadi satu mililiter penuh.

Mengapa menghitung banyak kotak itu penting

Distribusi sel pada kisi-kisi hemositometer tidak sepenuhnya seragam, jadi menghitung hanya satu kotak dapat memberikan perkiraan yang tidak tepat — terutama pada kepadatan sel yang rendah karena satu kotak mungkin hanya berisi sedikit sel. Menghitung empat kotak sudut standar (atau kesembilan kotak besar, bergantung pada desain ruang) dan merata-ratakan hasilnya akan menghaluskan variabilitas tersebut dan memberikan perkiraan konsentrasi yang lebih andal. Masukan 'penghitungan kuadrat' kalkulator ini memungkinkan Anda membagi jumlah total dengan berapa banyak kuadrat yang sebenarnya Anda hitung.

Dari konsentrasi hingga rencana pengenceran yang berfungsi

Setelah Anda mengetahui konsentrasi stok, hubungan C₁V₁ = C₂V₂ memungkinkan Anda bekerja mundur dari target kepadatan penyemaian ke rencana pemipetan sebenarnya. Jika konsentrasi target Anda lebih rendah dari stok Anda saat ini (seperti biasanya), menghitung volume stok yang dibutuhkan pada volume akhir yang Anda inginkan akan memberi tahu Anda berapa banyak stok yang harus digabungkan dengan media baru atau pengencer. Perhitungan ini sama dengan yang digunakan untuk pengenceran serial dan persiapan kurva standar, hanya diterapkan pada seluruh sel, bukan pada reagen terlarut.