La dilution en série est une méthode courante en laboratoire pour préparer plusieurs concentrations connues à partir d’une seule solution mère. Elle sert notamment aux ensemencements en microbiologie, aux titrages d’anticorps et tests ELISA, aux courbes étalons pour la qPCR et à tout protocole nécessitant des concentrations espacées selon un facteur constant. Ce calculateur détermine les concentrations à chaque étape, les volumes à transférer et de diluant par tube, ainsi que le facteur de dilution total à partir d’un seul ensemble de paramètres.
Fonctionnement du calculateur de dilutions en série
Dans une dilution en série, chaque tube est préparé à partir du précédent, sauf le premier qui est préparé à partir de la solution mère. Comme la réduction s’effectue étape par étape, la concentration à l’étape n est égale à la concentration initiale divisée par le facteur de dilution élevé à la puissance n (DFⁿ). Ce cumul explique pourquoi un facteur modéré par étape, comme une dilution au facteur 10, produit une réduction totale considérable après quelques étapes seulement : cinq étapes au facteur 10 donnent déjà une dilution totale de 100,000. Il explique aussi pourquoi le graphique des concentrations utilise un axe logarithmique : sur une échelle linéaire, les dernières étapes sembleraient confondues avec zéro alors qu’elles ne le sont pas.
Données à saisir et leur signification
La concentration de la solution mère est la valeur initiale de la solution non diluée, exprimée dans l’unité suivie : ng/mL, CFU/mL, molarité ou toute autre unité cohérente. Le facteur de dilution par étape doit être supérieur à 1 ; les valeurs courantes sont 2 pour une dilution par deux (par exemple, un titrage d’anticorps) et 10 pour une dilution décimale (par exemple, un ensemencement en microbiologie). Le nombre d’étapes correspond au nombre de tubes préparés après la solution mère. Le volume par tube est le volume final, en millilitres, que doit contenir chaque tube après mélange de l’aliquote transférée et du diluant. Il détermine les volumes affichés dans l’onglet Volumes, mais ne modifie pas la série des concentrations, qui dépend uniquement de la concentration mère et du facteur de dilution.
Limites et cas particuliers
Le facteur de dilution doit être supérieur à 1 : un facteur égal à 1 ne produit aucune dilution, tandis qu’un facteur inférieur à 1 nécessiterait un volume de diluant négatif, ce qui n’a pas de sens physique. Un grand nombre d’étapes combiné à des facteurs élevés peut produire des concentrations extrêmement faibles, difficiles à lire sur une échelle linéaire ; le calculateur représente donc toujours la série sur un axe logarithmique. Il suppose que le mélange et le pipetage sont parfaits à chaque étape. En pratique, de petites erreurs de pipetage s’accumulent tout au long de la série, si bien qu’une série longue comporte une incertitude cumulée plus importante qu’une série courte.