Calculez la concentration d’ADN ou d’ARN à partir d’une mesure spectrophotométrique A260, en tenant compte du facteur de dilution et du rapport de pureté 260/280.
Convert a spectrophotometer's A260 absorbance reading into a nucleic-acid concentration: C = A260 × factor × dilution. The factor depends on the nucleic-acid type.
Absorbance at 260 nm (unitless, e.g. from a NanoDrop).
×
1 if reading the sample undiluted.
Add this to also see the 260/280 purity ratio.
Assess sample purity from the ratio of absorbance at 260 nm to 280 nm: Purity = A260 / A280. Pure dsDNA reads ~1.8; pure RNA reads ~2.0.
Reading a diluted sample? Enter the dilution factor to scale the diluted A260 reading back to the concentration of the original, undiluted stock — and see what the diluted sample itself reads with no scaling applied.
×
e.g. 10 for a 1:10 dilution before reading.
Résultat
—
Enter values to compute.
Concentration—
Pureté 260/280—
Mesure (sans mise à l’échelle)—
5 min de lecture3 étapes7 termes3 exemples6 questionsC = A260 × factor × dilution
Estimer la quantité d’ADN ou d’ARN présente dans un échantillon est l’un des premiers contrôles de presque toutes les procédures de biologie moléculaire, avant le clonage, le séquençage, la PCR ou la transfection.
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Étapes
Comment utiliser cette calculatrice
3 étapes▸
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Saisissez votre mesure A260 et le type d’acide nucléique
Dans l’onglet Concentration, saisissez l’absorbance à 260 nm (A260) mesurée avec votre spectrophotomètre ou NanoDrop, puis choisissez le type d’acide nucléique — ADN double brin (ADNdb), ADN simple brin (ADNsb) ou ARN — car chacun possède un facteur de conversion différent. Si vous avez mesuré un échantillon dilué, indiquez aussi le facteur de dilution (laissez 1 pour une mesure sans dilution).
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Consultez la concentration et la pureté
La carte de résultat affiche la concentration en ng/µL (équivalente en valeur numérique à µg/mL), accompagnée d’une interprétation en termes simples. Ajoutez une mesure A280 dans le champ facultatif pour afficher aussi le rapport de pureté 260/280 et vérifier s’il est proche de la valeur idéale pour votre type d’échantillon.
3
Utilisez les onglets Pureté ou Dilution
Passez à l’onglet Pureté (260/280) pour vérifier la pureté de l’échantillon à partir de A260 et A280 sans facteur de dilution, ou utilisez l’onglet Dilution pour ramener la mesure diluée à la concentration de la solution mère initiale. Le résultat se met à jour instantanément : aucun bouton de calcul n’est nécessaire.
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Référence
Formule et méthodologie
3 formules▸
Concentration à partir de A260
C = A260 × factor × dilution
La concentration en acides nucléiques est proportionnelle à leur absorbance à 260 nm (loi de Beer-Lambert). Le facteur convertit une unité d’absorbance (1.0 DO260, pour un trajet optique standard de 1 cm) en concentration massique : 50 µg/mL pour l’ADN double brin (ADNdb), 33 µg/mL pour l’ADN simple brin (ADNsb) et 40 µg/mL pour l’ARN. Multipliez par le facteur de dilution si l’échantillon a été dilué avant la mesure. La valeur en µg/mL est numériquement identique à celle en ng/µL.
Rapport de pureté 260/280
Purity = A260 / A280
Les protéines absorbent le plus fortement autour de 280 nm, tandis que les acides nucléiques absorbent surtout autour de 260 nm. Le rapport entre ces deux mesures indique donc la quantité de protéines ou d’autres contaminants mélangés aux acides nucléiques. L’ADN double brin pur présente un rapport proche de 1.8 ; celui de l’ARN pur est proche de 2.0, car sa composition en bases et sa structure simple brin décalent légèrement son absorbance vers le haut.
Ramener une mesure diluée à la concentration initiale
C_undiluted = A260 × factor × dilution
Lorsqu’un échantillon est trop concentré pour être mesuré avec précision (au-delà d’un A260 d’environ 1.0 à 2.0, la plupart des appareils perdent leur linéarité), il faut le diluer avant la mesure. Multiplier l’A260 mesuré après dilution par le facteur de dilution permet de retrouver la concentration de la solution mère non diluée.
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Glossaire
Termes clés expliqués
7 termes▸
A260Absorbance d’un échantillon à une longueur d’onde de 260 nanomètres, à laquelle les acides nucléiques (ADN et ARN) absorbent le plus fortement la lumière UV. C’est la mesure principale utilisée par un spectrophotomètre ou un NanoDrop pour estimer la concentration en acides nucléiques.
SpectrophotométrieTechnique qui mesure la quantité de lumière d’une longueur d’onde donnée absorbée par un échantillon. Ici, elle sert à estimer la concentration et la pureté des acides nucléiques à partir de l’absorbance UV à 260 nm et 280 nm.
Facteur ADNdbConstante de conversion de 50 µg/mL par unité A260, utilisée pour l’ADN double brin. Elle reflète l’absorption de la lumière à 260 nm par un échantillon standard d’ADN en double hélice, par unité de concentration.
Rapport de puretéRapport des absorbances à deux longueurs d’onde (le plus souvent A260/A280), utilisé pour estimer la contamination d’un échantillon d’acide nucléique par des protéines ou d’autres substances absorbant les UV. Plus il est proche de la valeur idéale, plus l’échantillon est pur.
260/280Abréviation du rapport d’absorbance A260/A280, contrôle standard de la pureté de l’ADN ou de l’ARN extrait. Un rapport faible (nettement inférieur à 1.8) signale généralement une contamination par des protéines ou du phénol résiduels de l’extraction.
Facteur de dilutionNombre de fois qu’un échantillon a été dilué avant sa mesure au spectrophotomètre. Un facteur de 10 signifie qu’une part d’échantillon a été mélangée à neuf parts de tampon. Multiplier le résultat de la mesure diluée par ce facteur permet de retrouver la concentration de l’échantillon initial.
NanoDropMarque courante de spectrophotomètre à microvolume utilisée en biologie moléculaire pour mesurer A260, A280 ainsi que la concentration et la pureté des acides nucléiques qui en sont déduites, avec seulement 1 à 2 µL d’échantillon et sans cuvette.
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Situations types
Exemples concrets
3 exemples▸
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Vérification d’une minipréparation de plasmide
Concentration de base d’ADNdb
Mesure A260 0.5Type d’acide nucléique dsDNAFacteur de dilution 1
C = 0.5 × 50 × 1 = 25 ng/µL. Une mesure A260 de 0.5 pour un échantillon d’ADNdb non dilué donne une concentration de 25 ng/µL, rendement typique d’une minipréparation de plasmide.
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Mesure d’une préparation concentrée d’ADN génomique après dilution
Mise à l’échelle d’une mesure diluée
Mesure A260 (diluée) 0.6Type d’acide nucléique dsDNAFacteur de dilution 10
C = 0.6 × 50 × 10 = 300 ng/µL. Une dilution au 1:10 a été mesurée pour rester dans la plage linéaire de l’appareil ; l’application du facteur de dilution indique que la solution mère non diluée est à 300 ng/µL.
Pureté = 0.5 / 0.28 = 1.79 — tout près de la valeur idéale d’environ 1.8 pour l’ADNdb. Cela indique une préparation propre, avec peu de contamination protéique, adaptée au séquençage ou au clonage en aval.
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Référence
Citer cette calculatrice
APA et MLA▸
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Analyse approfondie
Calculer la concentration d’ADN à partir d’une mesure A260
Estimer la quantité d’ADN ou d’ARN présente dans un échantillon est l’un des premiers contrôles de presque toutes les procédures de biologie moléculaire, avant le clonage, le séquençage, la PCR ou la transfection. Les spectrophotomètres modernes et les appareils NanoDrop rendent cette mesure rapide, mais l’interprétation correcte des résultats suppose de comprendre A260, le facteur de conversion et le rapport de pureté 260/280.
Pourquoi A260 mesure la concentration en acides nucléiques
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L’ADN et l’ARN absorbent le plus fortement la lumière ultraviolette autour de 260 nanomètres, principalement en raison des cycles aromatiques de leurs bases nucléotidiques. Selon la loi de Beer-Lambert, l’absorbance est directement proportionnelle à la concentration pour un trajet optique donné. Une mesure spectrophotométrique à 260 nm (A260) peut donc être convertie en concentration si l’on connaît la constante de proportionnalité adaptée au type d’acide nucléique mesuré.
Pourquoi le facteur varie selon le type d’acide nucléique
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Le facteur de conversion — 50 µg/mL par unité A260 pour l’ADN double brin, 33 µg/mL pour l’ADN simple brin et 40 µg/mL pour l’ARN — varie parce que ces molécules n’absorbent pas exactement de la même façon à 260 nm par unité de masse. L’empilement des bases dans la double hélice réduit quelque peu l’absorbance de l’ADNdb par rapport aux brins simples moins structurés ; c’est pourquoi l’ADNsb et l’ARN, généralement moins appariés en solution, ont des facteurs massiques plus faibles. Employer un facteur inadapté au type d’échantillon est une cause fréquente d’estimation erronée de la concentration.
Interpréter le rapport de pureté 260/280
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Les protéines absorbent le plus fortement la lumière UV autour de 280 nm en raison d’acides aminés aromatiques comme le tryptophane et la tyrosine, tandis que les acides nucléiques absorbent surtout à 260 nm. Comparer les deux absorbances (A260/A280) donne donc une estimation rapide de la contamination protéique résiduelle dans un échantillon extrait. Un rapport proche de 1.8 est considéré comme pur pour l’ADN double brin ; pour l’ARN pur, il est proche de 2.0. Des valeurs nettement plus basses indiquent généralement des protéines ou du phénol résiduels issus de l’extraction, tandis que des valeurs nettement plus élevées peuvent signaler une contamination de l’ADN par l’ARN ou un échantillon dégradé.
Pourquoi la dilution améliore la précision des mesures
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La relation entre l’absorbance mesurée au spectrophotomètre et la concentration reste fiable jusqu’à un A260 d’environ 1.0 à 2.0, selon l’appareil. Les échantillons plus concentrés doivent être dilués avant la mesure ; il faut ensuite multiplier la concentration calculée à partir de la mesure diluée par le facteur de dilution pour retrouver celle de la solution mère. C’est précisément ce que fait automatiquement l’onglet Dilution de ce calculateur.
Limites des estimations fondées sur A260
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Les estimations fondées sur A260/A280 sont rapides et pratiques, mais moins précises que les méthodes de quantification par fluorescence (comme les tests PicoGreen ou Qubit), qui se lient spécifiquement à l’ADN double brin et sont bien moins sensibles à l’ARN contaminant, aux nucléotides libres ou aux protéines. Pour les applications exigeant une quantification précise, comme la préparation de bibliothèques de séquençage de nouvelle génération, les laboratoires confirment souvent une estimation NanoDrop par un test de fluorescence avant de poursuivre.
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Questions
Questions fréquentes
6 questions▸
Quelle formule permet de calculer la concentration d’ADN à partir d’A260 ?+
La concentration (en µg/mL, équivalente en valeur numérique à ng/µL) est égale à l’absorbance A260 multipliée par le facteur de conversion correspondant au type d’acide nucléique, puis par le facteur de dilution : C = A260 × factor × dilution. Le facteur vaut 50 pour l’ADN double brin, 33 pour l’ADN simple brin et 40 pour l’ARN.
Quel est le facteur de conversion de l’ADNdb, et pourquoi vaut-il 50 ?+
Le facteur de l’ADNdb est de 50 µg/mL par unité A260. Cette constante déterminée expérimentalement reflète l’absorption de la lumière à 260 nm par l’ADN double brin, par unité de concentration massique, pour un trajet optique standard de 1 cm.
À quoi ressemble le rapport 260/280 d’un échantillon d’ADN pur ?+
Un rapport 260/280 d’environ 1.8 est généralement considéré comme pur pour l’ADN double brin. Des valeurs bien inférieures à 1.8 suggèrent une contamination par des protéines ou du phénol ; des valeurs supérieures à environ 1.9–2.0 peuvent indiquer une contamination de la préparation d’ADN par de l’ARN.
Pourquoi la cible de pureté de l’ARN est-elle différente, autour de 2.0 ?+
L’ARN est majoritairement simple brin et sa composition en bases diffère de celle de l’ADN double brin. Ces deux facteurs augmentent légèrement son absorbance massique à 260 nm par rapport à celle à 280 nm, comparativement à l’ADNdb. Un échantillon d’ARN pur présente donc généralement un rapport 260/280 proche de 2.0.
Quelles unités ce calculateur utilise-t-il ?+
A260 et A280 sont des valeurs d’absorbance sans unité. La concentration obtenue est exprimée en ng/µL, unité numériquement équivalente à µg/mL. Le rapport de pureté 260/280 est également sans unité : il s’agit simplement du quotient des deux absorbances.
Pourquoi mon échantillon semble-t-il contaminé même après une extraction propre ?+
Un rapport 260/280 faible indique le plus souvent la présence de protéines ou de phénol résiduels provenant des réactifs d’extraction, plutôt qu’un échec de la préparation. Une nouvelle précipitation ou purification (par exemple un lavage supplémentaire à l’éthanol ou une purification sur colonne) suffit souvent à résoudre le problème. Des absorbances globalement très faibles peuvent aussi rendre le rapport instable, car A260 et A280 sont alors proches de la limite de détection de l’appareil.
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