La densité cellulaire — le nombre de cellules par millilitre de suspension — est une mesure courante en culture cellulaire, que vous prépariez une transfection, l’ensemencement d’une boîte ou une série de dilutions. Cette calculatrice convertit le comptage brut de l’hémocytomètre en concentration, puis calcule le nombre total de cellules et la dilution nécessaire pour atteindre une densité d’ensemencement précise.
Origine du facteur de conversion 10⁴
Un hémocytomètre de Neubauer standard est gravé de façon que chacun de ses grands carrés couvre une surface connue. Lorsque la lamelle est bien placée, la chambre a une profondeur fixe de 0.1 mm. Chaque carré contient donc exactement 0.1 mm³, soit 0.1 microlitre (0.0001 mL). Pour convertir le comptage par carré en cellules par millilitre, on divise par 0.0001 mL, ce qui revient à multiplier par 10,000 (10⁴). La formule multiplie donc la moyenne par carré par 10⁴ pour convertir ce petit volume en un millilitre.
Pourquoi compter plusieurs carrés
Les cellules ne sont pas réparties parfaitement uniformément sur la grille : le comptage d’un seul carré peut donc fausser l’estimation, surtout à faible densité. Compter les quatre carrés d’angle habituels (ou les neuf grands carrés, selon le modèle), puis calculer la moyenne, réduit cette variabilité. Le champ « Carrés comptés » permet de diviser le total par le nombre de carrés réellement examinés.
De la concentration au plan de dilution
Une fois la concentration de la solution mère connue, la relation C₁V₁ = C₂V₂ permet de partir de la densité cible pour établir un plan de pipetage. Si la concentration cible est inférieure à celle de la solution mère, le calcul du volume nécessaire pour le volume final souhaité indique la quantité à mélanger au milieu frais ou au diluant. C’est le même calcul que pour les dilutions en série, appliqué ici à des cellules entières.