Die Zelldichte – die Anzahl der Zellen pro Milliliter einer Suspension – ist eine der häufigsten Messungen in der Zellkultur, unabhängig davon, ob Sie eine Transfektion planen, eine Platte aussäen oder eine Verdünnungsreihe vorbereiten. Dieser Rechner wandelt eine rohe Hämozytometerzahl in eine Konzentration um und verkettet diese Konzentration dann in die Gesamtzellausbeute und die Verdünnung, die zum Erreichen einer bestimmten Aussaatdichte erforderlich ist.
Woher der Umrechnungsfaktor 10⁴ kommt
Ein Standard-Neubauer-Hämozytometer ist so geätzt, dass jedes seiner großen Zählquadrate einen bekannten Bereich abdeckt, und die Kammer hat eine feste Tiefe von 0,1 mm, wenn das Deckglas richtig sitzt. Damit hat jedes Quadrat ein Volumen von genau 0,1 mm³, was 0,1 Mikroliter (0,0001 ml) entspricht. Um die Anzahl pro Quadrat in Zellen pro Milliliter umzuwandeln, dividieren Sie durch das Volumen von 0,0001 ml – was einer Multiplikation mit 10.000 (10⁴) entspricht. Aus diesem Grund multipliziert die Formel die durchschnittliche Anzahl pro Quadrat mit 10⁴: Sie rechnet einfach das winzige gezählte Volumen in einen vollen Milliliter um.
Warum es wichtig ist, mehrere Quadrate zu zählen
Die Zellverteilung über ein Hämozytometer-Gitter ist nicht vollkommen gleichmäßig, daher kann die Zählung nur eines Quadrats zu einer verzerrten Schätzung führen – insbesondere bei niedrigen Zelldichten, bei denen ein einzelnes Quadrat möglicherweise nur sehr wenige Zellen enthält. Das Zählen über die standardmäßigen vier Eckquadrate (oder alle neun großen Quadrate, je nach Kammerdesign) und die Mittelung des Ergebnisses glättet diese Variabilität und liefert eine zuverlässigere Konzentrationsschätzung. Mit der Eingabe „Gezählte Quadrate“ dieses Rechners können Sie Ihre Gesamtzahl durch die Anzahl der tatsächlich gezählten Quadrate dividieren.
Von der Konzentration zu einem funktionierenden Verdünnungsplan
Sobald Sie Ihre Stammkonzentration kennen, können Sie mithilfe der C₁V₁ = C₂V₂-Beziehung von einer Zielaussaatdichte rückwärts zu einem tatsächlichen Pipettierplan arbeiten. Wenn Ihre Zielkonzentration niedriger ist als Ihr aktueller Vorrat (was normalerweise der Fall ist), erfahren Sie durch Berechnen des benötigten Vorratsvolumens bei Ihrem gewünschten Endvolumen genau, wie viel Vorrat Sie mit frischem Medium oder Verdünnungsmittel kombinieren müssen. Dies ist die gleiche Berechnung, die auch für Reihenverdünnungen und die Erstellung von Standardkurven verwendet wird, nur dass sie auf ganze Zellen statt auf ein gelöstes Reagenz angewendet wird.